丝状真菌分子细胞生物学与实验技术

　　前言
　　第一章 丝状真菌基因型特征的鉴定
　　1 概述
　　2 基因组变异的主要特征
　　3 确定研究目的
　　4 用于基因组分析的技术
　　5 假设
　　6 选择最佳策略
　　方案1 链格孢真菌的RAPD分析
　　7 AFLP技术的原理及其应用
　　方案2 丝状真菌的AFLP分析
　　方案3 丝状真菌的cDNA-AFLP
　　8 变性梯度凝胶电泳（DGGE）
　　方案4 土壤中真菌的DGGE分析
　　9 重要的数据库和互联网资源
　　第二章 丝状真菌核酸的提取与分析
　　1 概述
　　2 基因组DNA的分离
　　方案1 CTAB法提取真菌基因组DNA
　　方案2 氯化苄（benzylchloride）法提取真菌基因组DNA
　　方案3 丝状真菌总DNA的分离
　　方案4 固体平板上菌小量DNA的块速提取（以稻瘟病菌为例）
　　方案5 真菌小量DNA的快速提取
　　3 丝状真菌RNA的提取
　　4 RNA的操作
　　方案6 Trizol法提取丝状真菌总RNA
　　方案7 状真菌总RNA的提取
　　方案8 真菌总RNA的小量提]K（Trizd法）
　　第三章 丝状真菌的DNA转化
　　1 概述
　　2 选择性标记和转化载体
　　3 待转化DNA的质量
　　4 DNA的进入
　　5 REMI转化
　　方案1 稻瘟病菌（Magnapotthegrisea）原生质体的制备及转化
　　方案2 毛壳菌原生质体的制备
　　6 真菌AATMT转化
　　方案3 感受态农杆菌细胞的制备与转化
　　方案4 利用农杆菌转化真菌
　　7 电击转化
　　方案5 Tapesiayallundae的电击转化
　　8 转化DNA的命运
　　方案6 丝状真菌中的质粒拯救
　　方案7 农杆菌电击转化感受态的制备与转化
　　第四章 丝状真菌的遗传分析
　　1 子囊菌遗传分析
　　方案1 对真菌孢子进行化学诱变
　　方案2 对真菌的孢子进行紫外诱变
　　方案3 营养缺陷型突变体的筛选与鉴定
　　方案4 温度敏感型突变群体的制备
　　方案5 单孢分离
　　方案6 构巢曲霉的八分体分析
　　方案7 通过准性重配确定里连锁群
　　方案8 稻瘟病菌温度敏感型突变体的筛选
　　2 担子菌遗传分析
　　方案9 鬼伞菌在人工培养条件子实体和担孢子的产生
　　方案10 通过Ct-IEF凝胶电泳分离C.cinereus的染色体
　　方案11 C．cinereus的四分体分离
　　方案12 C．cinereus粉孢子的紫外诱变
　　方案13 利用NTG（MNNG）／EMS对担子菌进行诱变
　　方案14 平板印迹
　　附：担子菌研究中的标准培养基
　　第五章 丝状真菌的基因组分析
　　1 概述
　　2 遗传图谱
　　方案1 克隆固定大小的基因组DNA作为RFLP探针
　　方案2 RAPD操作要点
　　3 电泳核型分析
　　方案3 琼脂糖栓中制备完整染色体DNA
　　方案4 琼脂糖栓电泳
　　方案5 钳位均匀电场电泳
　　4 物理图谱
　　方案6 染色体DNA的RecA-AC
　　方案7 准备BAC载体DNA
　　方案8 准备BAC插入DNA
　　方案9 BAC插入DNA大小的选择，恢复和克隆
　　方案10 将文库克隆排列到杂交膜上
　　方案11 收集克隆文库
　　5 筛选文库
　　方案12Southern杂交分析混合文库和克隆阵列文库
　　6 染色体步移（chromosomewalking）
　　方案13BAC或者黏粒末端RNA探针的合成
　　方案14根据插入片段末端序列制备的探针
　　7 真菌基因组分析相关数字资源
　　第六章 真菌发育过程的细胞学分析
　　1 概述
　　2 丝状真菌生长的测定
　　方案1 菌丝顶端生长的测定
　　方案2 菌落生长速度的测定
　　方案3 直线生长速率的测定
　　3 丝状真菌孢子的萌发
　　方案4 真菌孢子的萌发测定
　　4 稻瘟病菌细胞生物学分析
　　方案5 稻瘟病菌产孢培养、孢子收集和附着胞诱导培养
　　方案6 稻瘟病菌侵染过程的组织病理学观察
　　方案7 稻瘟病菌孢子、附着胞内脂质体、糖原的观察
　　方案8 细胞自噬现象的观察
　　方案9 酒精氧化酶活性测定
　　方案10 冷冻替代用于电子显微镜观察
　　方案11 细胞核，细胞壁和隔膜的染色
　　第七章 丝状真菌的信号传导
　　1 概述
　　2 蛋白抽提
　　方案1 构巢曲霉（Aspergillusnidulans）蛋白激酶的抽提
　　3 蛋白免疫沉淀反应
　　方案2 NIMA在大肠埃希菌（E．coli）中的表达和His-tag亲和纯化
　　方案3 蛋白质免疫沉淀（IP）
　　4 凝胶阻滞试验（gel-shiftassay）检测蛋白的磷酸化状态
　　方案4 NIMA磷酸化状态的凝胶阻滞试验
　　5 蛋白激酶的底物特异性分析
　　方案5 NIMA激酶分析
　　第八章 丝状真菌的细胞生物学技术
　　1 电子显微镜工作原理及其应用
　　2 扫描电子显微镜样品制备的原理与方法
　　3 透射电子显微镜样品制备的原理与方法
　　4 电镜细胞化学技术
　　5 免疫组化技术
　　第九章 丝状真菌的生化研究方法
　　1 概述
　　2 抽提物的准备
　　方案1 菌丝的摇瓶培养
　　方案2 疏水蛋白的分离
　　3 细胞组分的准备
　　方案3 细胞膜的分离
　　方案4 脉孢霉的液泡分离
　　方案5 线粒体的分离
　　方案6 细胞核的分离
　　方案7 细胞核的抽提
　　方案8 微体的分离
　　4 蛋白分析
　　方案9 孢子和菌丝的小量的蛋白质抽提
　　方案10 从固体培养物中分离胞外酶（N．crassa的脂肪酶）
　　方案11 从新鲜菌丝分离细胞内蛋白，适用于蛋白水解敏感蛋白的方法
　　方案12 从新鲜菌丝分离细胞内蛋白
　　方案13 从冻干菌丝分离胞内蛋白
　　方案14 酶学分析的代谢物抽提
　　第十章 真菌研究中的免疫学方法
　　第十一章 丝状真菌的功能基因组分析
　　第十二章 丝状真菌分子进化与系统发育分析
　　第十三章 丝状真菌群体遗传分析
　　第十四章 真菌分子生物信息学常用软件的使用
　　参考文献

　　    本书通过对当前真菌分子细胞生物学研究最新研究进展，总结了真菌分子细胞生物学研究的技术要点，有针对性的提出了真菌分子细胞生物学研究的技术原理和方案，为真菌研究人员提供了切实可行的参考技术。全书分为14章。主要包括：真菌基因型的鉴定与特征分析、核酸的分析、真菌遗传转化、功能基因组学、生化与免疫方法、分子系统学及生物信息学常用软件等。