生命科学实验指南系列：精编细胞生物学实验指南

　　目录译者序前言第1章 细胞培养 1单元1.1 哺乳动物细胞培养的基本方法 2基本方案 单层细胞的胰酶消化和传代 2备择方案 悬浮培养的细胞传代 3支持方案1 人中层贴壁细胞的冻存 3支持方案2 悬浮细胞的冻存 4支持方案3 人细胞系的解冻与复苏 4支持方案4 用血细胞计数板和台盼蓝染色法测定细胞数目及活性 4支持方案5 细胞运输的准备 5单元1.2 适于哺乳动物细胞的培养基 6基本方案1 制备含血清的培养基 6基本方案2 制备血清减量或无血清培养基 7基本方案3 HAT选择培养基的制备 8基本方案4 转化细胞在软琼脂中的生长 9支持方案1 培养基中pH的调节 9支持方案2 抗生素在培养基中的应用 10单元1.3 细胞培养的无菌技术 11基本方案1 无菌技术 11基本方案2 层流式超净台的使用 12单元1.4 灭菌和过滤 13基本方案1 液体的高乐灭菌 14备择方案 干燥物品的高压消毒 15基本方案2 干热灭菌和清除热原法 16基本方案3 消毒剂的应用：70％乙醇 16溶液的过滤除菌 17基本方案4 真空过滤 17基本方案5 小体积非水溶性液体的正压过滤 18单元1.5 确定和控制细胞培养的微生物污染 19基本方案1 细菌和真菌污染的检测 19基本方案2 直接培养法检测支原体污染 21基本方案3 应用抗生素控制微生物污染 23单元1.6 酵母培养及培养基 24培养基的制备 24酵母培养的综合考虑 30第2章 细胞的制备与分离 35单元2.1 成纤维细胞培养的建立 36基本方案 36单元2.2 人淋巴细胞的制备和培养 40基本方案1 通过高分子质量的蔗糖-泛影钠(Ficoll-Hypaque)梯度离心制备淋巴细胞 40基本方案2 从淋巴细胞群里制备单核/巨噬细胞和树突状细胞 42基本方案3 通过包被在磁珠表面的单克隆抗体分选T细胞和B细胞 42单元2.3 人脐静脉内皮细胞的制备 44基本方案 44单元2.4 转染EB病毒产生永生的B细胞株 45基本方案 45单元2.5 激光捕获显微切割 46基本方案 从组织切片中分离一种纯的细胞群 47支持方案 苏木素和伊红染色组织的激光显微切割 49第3章 亚细胞组分分离和细胞器分离 50单元3.1 细胞组分分离概述 51单元3.2 分离大鼠肝细胞质膜片层与浆膜结构域 59基本方案1 分离质膜片层 59支持方案1 检测碱性磷酸二酯酶I的活性 61基本方案2 分离质膜结构域 63支持方案2 K+激活的对硝基苯酚磷酸酯酶活性測定实验 63支持方案3 5'-核苷酸酶活性测定实验 64支持方案4 间接免疫荧光法检测与质膜片层相连的蛋白质 65单元3.3 利用差速及密度梯度离心法从组织和细胞中分离Golgi膜 66基本方案1 利用蔗糖密度筛从大鼠肝脏中快速分离Golgi膜 67基本方案2 将大鼠肝脏提取的轻线粒体组分悬浮于非连续的蔗糖梯度液中来分离Golgi膜 68基本方案3 将培养的细胞悬浮于非连续的蔗糖梯度液中来分离Golgi膜 69基本方案4 用白发形成梯度的IODIXANOL梯度液从肝细胞微粒体组分中分离Golgi膜 70支持方案 测定UDP-半乳糖半乳糖基转移酶 71单元3.4 利用差速离心及密度梯度离心从组织及细胞中分离溶酶体 72基本方案1 使用白发形成梯度的PERCOLL梯度液从大鼠肝脏中分离溶酶体 72基本方案2 利用自发形成梯度的PERCOLL梯度液从培养的人HIJ-60细胞中分离溶酶体 74支持方案1 酸性磷酸酶的测定 75支持方案2 β-N乙酰葡糖胺酶的测定 76单元3.5 差速离心法从组织和细胞中分离线粒体 76基本方案1 用大鼠肝脏制备重线粒体组分 77基本方案2 中心脏线粒体的大量制备 78基本方案3 用骨骼肌制备线粒体 79基本方案4 用培养的细胞制备线粒体 80基本方案5 用酵母菌（酿酒酵母）制备线粒体 80单元3.6 密度梯度离心法纯化粗线粒体组分 81基本方案1 用连续蔗糖梯度液分离大鼠肝脏的线粒体组分 82基本方案2 用非连续PERCOLL梯度液从大鼠脑分离线粒体 83基本方案3 用自发形成梯度的PERCOLL梯度液分离线粒体组分 84支持方案1 线粒体的琥珀酸脱氢酶分析 84支持方案2 溶酶体的β-半乳糖苷酶分析 85支持方案3 过氧化物体的过氧化氢酶分析 86单元3.7 用差速离心法和密度梯度离心法从组织和细胞中分离过氧化物体 86基本方案1 从大鼠肝脏分离轻线粒体组分 87基本方案2 用预先形成的连续IODIXANOL梯度液分离大鼠肝脏轻线粒体组分中的过氧化物体 88基本方案3 用预先形成的连续NYCODENZ梯度液分离大鼠肝脏轻线粒体组分中的过氧化物体 89基本方案4 用预先形成的连续NYCODENZ梯度液从酵母原生质体分离过氧化物体 90基本方案5 用预先形成的连续NYCODFNZ梯度液从培养细胞(HcpG2)分离过氧化物体 91支持方案 内质网标志酶NADPH细胞色素c还原酶的分析 92单元3.8 从哺乳动物组织中分离细胞核及核膜 93基本方案1 使用蔗糖密度筛从大鼠肝组织匀浆中分离细胞核 93备择方案 使用IODIXANOL梯度液从动物或植物（麦芽）细胞中分离细胞核 94基本方案2 分离细胞核膜：高离子强度的方法 95基本方案3 分离细胞核膜：低离子强度的方法 96支持方案1 二苯胺检测DNA 97支持方案2 苔黑素测定RNA 97支持方案3 溴化乙锭测定RNA及DNA 98单元3.9 酿酒酵母的亚细胞组分分离 99基本方案1 利用差速离心法分离原生质体组分 111支持方案 应用酶解酶制备酵母原生质体 113基本方案2 应用NYCODFNZ进行平衡密度梯度组分分离 114基本方案3 在蔗糖分级梯度液中进行P13000膜的组分分离 116基本方案4 应用FICOLL分级梯度液分离完整的囊泡 118基本方案5 应用FICOLL分级梯度液分离完整的细胞核 120基本方案6 应用NYCODENZ分级梯度液分离乳糖诱导的线粒体 124基本方案7 用蔗糖分级梯度液分离油酸盐诱导的过氧化物酶体 127基本方案8 用蔗糖分级梯度液分离内质网 129基本方案9 用蔗糖分级梯度液从完整的酵母细胞中分离质膜 131基本方案10 从完整的酵母细胞中分离细胞溶胶 132第4章 细胞生物学研究的工具——抗体 135单元4.1 单克隆抗体的制备 136基本方案1 制备单克隆抗体的免疫方法 136基本方案2 细胞融合与杂交瘤细胞的选择 137支持方案1 筛选原始杂交瘤上清 140支持方案2 杂交瘤细胞系的建立 140支持方案3 用有限稀释法进行克隆化培养 141支持方案4 制备克隆化/扩增培养基 142单元4.2 多克隆抗体的制备 142基本方案 用弗式佐剂免疫产生多克隆抗体 142备择方案 用其他佐剂免疫产生多克隆抗血清 144支持方案 血清的制备 145单元4.3 免疫球蛋白G的纯化 115基本方案1 硫酸铵沉淀和分子筛层析 145基本方案2 蛋白A葡聚糖亲和层析 116备择方案1 蛋白G葡聚糖亲和层析 148备择方案2 抗大鼠k链单克隆抗体结合的葡聚糖亲和层析 118基本方案3 以Tris    Cl为缓冲液的DE52离子交换层析 149单元4.4 抗体缀合物用于细胞生物学研究 I50基本方案 抗体与荧光团或生物素的结合 150支持方案 估计抗体浓度的方法 155第5章 显微镜术 156单元5.1 光学显微镜的校准及调节 157光学显微镜的主要部件 158亮视场与荧光显微镜术成像及Kohler照明光路的基础知识 162基本方案1 亮视场，透射显微镜术的Kohler照明校准 164基本方案2 目镜的校准 166基本方案3 表面荧光显微镜Koh1er照明模式的校准 166基本方案4 相差显微镜术的校准 167支持方案 显微镜光学部件的维护及清洗 169单元5.2 荧光显微镜术 170荧光显微镜光学系统 170荧光显微镜部件 171数字化暗室 174单元5.3 免疫荧光染色 175基本方案 培养细胞的免疫荧光标记 175单元5.4 荧光染料及荧光脂类衍生物标记细胞器 177基本方案1 同定细胞的内质网染色 179备择方案 活细胞内内质网染色 180基本方案2 活细胞内高尔基复合体染色 180基本方案3 线粒体染色 182单元5.5 基本共聚焦显微镜术 183光切基础 183共聚焦显微镜的类型 181应用指南 187单元5.6 用免疫过氧化物酶方法定位培养细胞和组织的抗原 191计划策略 192基本方案1 培养细胞的免疫过氧化物酶染色 192基本方案2 组织的免疫过氧化物酶染色 194单元5.7 低温免疫金电子显微镜技术 196基本方案 免疫金标记 197支持方案1 用免疫金标记方法同定细胞 198支持方案2 用免疫金标记方法固定组织 198支持方案3 免疫金标记方法做冰冻切片 199支持方案4 经碳聚乙烯醇缩甲醛和氯乙聚乙烯醇三元共聚物处理的铜栅格的准备 200单元5.8 相关的视频光学/电子显微镜术 201基本方案 相关的视频光学/电子显微镜术 201单元5.9 活细胞内微管和肌动蛋白丝的荧光斑点显微镜技术(FSM) 205计划策略 205基本方案1 设计一个时延数字化FSM显微镜系统 206基本方案2 活细胞内细胞骨架的时延FSM成像 210基本方案3 时延FSM系列影像的定性和定量分析 212支持方案1 FSM荧光标记的微管蛋白的制备 213支持方案2 FSM荧光标记肌动蛋白的制备 216单元5.10 作为活细胞影像工具的GFP 219制备融合蛋白 219第6章 细胞蛋白质的特性 225单元6.1 膜结合蛋白质的分析 226基本方案1 碱性碳酸盐提取 226备择方案1 尿素提取 227备择方案2 高盐提取 227备择方案3 Triton X-114相位分离 227支持方案 Triton X-114预浓缩 228基本方案2 磷脂酰肌醇磷脂酶(PI-PLC)水解GPI结合蛋白 228基本方案3 Triton X-100对不溶性整合膜蛋白和GPI结合蛋白的增溶作用 229单元6.2 蔗糖密度梯度区带沉淀法测定分子质量 230基本方案1 利用梯度自动形成仪制备蔗糖梯度的区带离心 231备择方案1 用

　　《精编细胞生物学实验指南》内容翔实全面，主要包括：细胞培养、细胞的制备与分离、亚细胞组分分离和细胞器分离、抗体、显微镜技术、细胞蛋白质的特性、电泳与免疫印迹、蛋白标记和免疫沉淀、蛋白质的磷酸化作用、蛋白质转运，以及细胞增殖、衰老和死亡、体外重建、细胞黏附和细胞外基质、细胞的能动性、细胞器运动。《精编细胞生物学实验指南》还附有各种实用信息和数据，包括试剂与溶液的配制、细胞生物学研究中常用的药物概要和各种常用技术的介绍等。