新药药理学研究方法

　　第1章分子药理学实验方法1
　　11核酸技术3
　　111质粒操作3
　　112PCR技术6
　　113重组DNA技术14
　　114基因转染技术18
　　115核酸杂交23
　　116基因芯片技术33
　　117反义核酸技术38
　　118RNA干扰42
　　12蛋白质技术45
　　121常规蛋白质定量方法45
　　122酶联免疫吸附测定47
　　123聚丙烯酰胺凝胶电泳51
　　124Western印迹法57
　　125免疫共沉淀59
　　126酵母双杂交62
　　127膜片钳技术67
　　128放射配体受体结合实验73
　　13细胞培养和形态、功能检测80
　　131常规细胞培养80
　　132原代大鼠细胞分离和培养85
　　133细胞凋亡检测方法91
　　134流式细胞分析96
　　135免疫组织化学染色100
　　136酶联免疫斑点法104
　　137单细胞微凝胶电泳107
　　参考文献108
　　第2章新药主要药效学试验方法112
　　21中枢神经系统药物114
　　211麻醉药物114
　　212镇静催眠药123
　　213抗癫痫、抗惊厥药物129
　　214抗帕金森病药物145
　　215抗老年性痴呆药物149
　　216抗精神分裂症药物156
　　217抗焦虑药实验方法161
　　218抗抑郁药物178
　　219镇痛药物192
　　2110中枢兴奋药物197
　　2111阿片戒断反应治疗药物199
　　22 心血管系统药物202
　　221抗心律失常药物202
　　222抗高血压药物207
　　223抗心肌缺血药物211
　　224溶栓药物218
　　225抗凝血药物224
　　226抗血小板药物227
　　227调血脂药物和抗动脉粥样硬化药物234
　　228防治脑缺血损伤药物237
　　23抗肿瘤药物242
　　231体外抗肿瘤试验242
　　232常规体内抗肿瘤药物试验245
　　233生物反应调节剂的试验方法247
　　234原位移植模型抗肿瘤试验247
　　235抗肿瘤转移试验249
　　236抗肿瘤血管新生药物试验254
　　24抗细菌、真菌、病毒和寄生虫药物257
　　241抗细菌药物257
　　242抗真菌药物271
　　243抗乙型肝炎病毒药物278
　　244抗人类免疫缺陷病毒药物281
　　245抗疟药物286
　　25抗骨和关节病药物291
　　251治疗骨质疏松症药物291
　　252促进骨折愈合药物293
　　253抗关节炎药物295
　　26抗糖尿病药物299
　　261糖耐量试验300
　　262化学诱导剂致动物糖尿病模型300
　　263遗传性糖尿病动物模型试验303
　　264α葡糖苷酶活性测定305
　　27消化系统药物306
　　271抗消化性溃疡药物306
　　272抗胃炎药物309
　　273胃肠解痉药物311
　　274催吐药及止吐药313
　　275泻药及止泻药315
　　276抗急性肝损伤药物316
　　277抗肝纤维化药物318
　　28血液系统药物321
　　281防治贫血药物321
　　282治疗白细胞减少和粒细胞缺乏症药物323
　　283治疗血小板减少症的药物325
　　284血容量扩充剂326
　　29呼吸系统药物328
　　291平喘药物328
　　292镇咳药物334
　　293祛痰药物336
　　210泌尿生殖系统药物339
　　2101抗肾小球肾炎药物339
　　2102促进尿道结石排出药物341
　　2103治疗男性勃起功能障碍药物344
　　2104治疗良性前列腺增生药物347
　　2105作用于子宫平滑肌药物348
　　211抗放射病药物352
　　参考文献356
　　第3章新药非临床安全性评价方法366
　　31一般药理学研究367
　　311目的和意义367
　　312实验材料和分组给药367
　　313中枢神经系统研究368
　　314心血管系统研究372
　　315呼吸系统研究373
　　316追加或补充的安全药理学研究373
　　32单次给药毒性试验374
　　321目的和意义374
　　322主要内容和要求376
　　323急性毒性试验常用方法379
　　33重复给药毒性试验382
　　331目的和意义382
　　332主要内容和要求383
　　333注意问题386
　　34遗传毒性试验392
　　341鼠伤寒沙门菌诱变试验（Ames试验）392
　　342体外培养哺乳动物细胞染色体突变试验396
　　343小鼠的骨髓微核试验397
　　35生殖毒性试验401
　　351一般生殖毒性试验401
　　352致畸敏感期毒性试验403
　　353围产期毒性试验405
　　36致癌试验407
　　361致癌试验的必要性407
　　362致癌试验原则409
　　363致癌试验的剂量选择410
　　364哺乳动物培养细胞恶性转化试验413
　　365动物短期致癌试验414
　　366动物长期致癌试验414
　　367生物技术药物致癌试验416
　　37毒代动力学在药物长期毒性评价中的应用417
　　371毒代动力学研究的基本考虑和方法419
　　372长期毒性评价中药物暴露评价的其他方面420
　　38免疫毒性试验420
　　381基本原则421
　　382常规毒性试验中免疫毒性相关指标422
　　383额外的免疫毒性试验423
　　384免疫原性、自身免疫和免疫刺激425
　　39局部刺激性试验426
　　391皮肤刺激性试验426
　　392注射给药部位刺激性试验428
　　393直肠刺激性试验430
　　394阴道刺激性试验430
　　395滴鼻剂和吸入剂刺激性试验431
　　396口腔用药或滴耳剂刺激性试验432
　　397眼刺激性试验433
　　398溶血性试验434
　　310过敏性试验436
　　3101主动皮肤过敏试验437
　　3102豚鼠最大化试验和Buehler试验439
　　3103啮齿类局部淋巴结试验440
　　3104被动皮肤过敏试验442
　　3105全身主动过敏试验443
　　3106皮肤光毒性试验444
　　3107皮肤光过敏反应试验446
　　3108过敏性试验的注意事项448
　　311药物依赖性的动物试验449
　　3111阿片类药物的身体依赖性试验方法450
　　3112镇静催眠药和抗焦虑药的身体依赖性试验方法456
　　3113评价药物精神依赖性的试验方法458
　　参考文献464
　　第4章非临床药代动力学试验方法466
　　41非临床药代动力学试验设计467
　　411总体要求467
　　412研究项目468
　　413数据处理与分析470
　　414结果与评价470
　　415问题与处理思路471
　　42分析方法的建立与确证472
　　421方法学确证的定义和分类473
　　422对参照标准品的要求474
　　423化学分析方法的形成474
　　424方法学确证的建议476
　　425免疫分析方法和微生物分析方法的形成477
　　426确证后的方法在药物分析中的应用478
　　427档案管理和方法学结果总结480
　　428术语481
　　429生物分析方法确证实例482
　　43化学药物非临床药代动力学实验方法491
　　431单次给药的药代动力学研究491
　　432多次给药的药代动力学研究496
　　433口服药物的吸收和生物利用度研究498
　　434给药后药物在体内的组织分布研究500
　　435药物在体内的粪、尿、胆汁排泄研究505
　　436生物转化研究509
　　437对药物代谢酶活性的影响研究533
　　44生物技术药物药代动力学研究方法537
　　441概论537
　　442常用分析方法544
　　参考文献556
　　第5章新药临床前评价的试验设计与统计分析559
　　51试验设计概述559
　　511试验设计的意义559
　　512试验设计的原理560
　　513试验设计三要素561
　　514试验设计四原则561
　　515试验设计类型562
　　52假设检验中样本大小的估计563
　　521样本大小估计所需要的前提条件563
　　522采用定量资料的单组设计、配对设计或交叉设计时样本大小的估计564
　　523采用成组设计时所需的样本含量565
　　524多个样本均数的比较或完全随机区组设计时所需样本含量566
　　525两总体概率比较时所需的样本含量567
　　526多个样本频率比较时所需样本含量568
　　53常见的试验设计类型及相应资料的统计分析568
　　531正态分布的概念与正态性检验568
　　532方差齐性的概念与方差齐性检验570
　　533单组设计和配对设计及相应资料的统计分析570
　　534成组设计及相应资料的统计分析572
　　535单因素多水平设计及相应资料的统计分析574
　　536优效性、等效性和非劣效性检验576
　　54较复杂的试验设计简介579
　　541配伍组设计579
　　542拉丁方设计580
　　543交叉设计581
　　544析因设计583
　　545重复测量设计583
　　546正交设计584
　　547均匀设计585
　　55常见的定性资料的表达格式与统计分析586
　　551横断面研究设计的2×2表资料及其统计分析586
　　552队列研究设计的2×2表资料及其统计分析588
　　553病例对照研究设计的2×2表资料及其统计分析588
　　554配对研究设计的2×2表资料及其统计分析589
　　555双向无序R×C表资料及其统计分析590
　　556结果变量为有序变量的单向有序R×C表资料及其统计分析591
　　557双向有序且属性不同的R×C表资料及其统计分析593
　　558双向有序且属性相同的R×C表资料及其统计分析594
　　56按直线规律研究两变量之间的相互关系与依赖关系595
　　561直线相关与回归分析的基本概念595
　　562直线相关与回归的正确步骤595
　　563直线相关与回归分析常见错误595
　　564直线相关与回归分析计算公式及假设检验596
　　565直线相关与回归分析的区间估计问题——利用回归方程进行预报和控制
　　598
　　566直线相关与回归分析应用实例599
　　567用概率法求半数有效量600
　　57按曲线规律研究两变量之间的依赖关系602
　　571曲线回归分析的基本概念602
　　572曲线回归分析的正确步骤604
　　573曲线回归分析应用实例605
　　574曲线回归分析应用中的常见错误607
　　58单因素K水平（K≥2）设计生存时间数据统计分析609
　　581生存时间数据特点及统计描述609
　　582由生存时间数据计算所得的多个生存率的假设检验611
　　583由生存时间数据描述的生存曲线的比较612
　　59药效学和毒理学的试验设计与统计分析614
　　591常见的试验设计模式与存在的问题614
　　592定量资料的数据结构与统计分析方法的合理选择620
　　593析因设计定量资料统计分析方法及实例621
　　594重复测量设计定量资料统计分析方法及实例622
　　参考文献623
　　第6章新药筛选方法学625
　　61样品库的建立626
　　611筛选样品的要求626
　　612天然产物628
　　613提取物633
　　614组合生物催化637
　　615合成化合物641
　　62高通量细胞筛选模型651
　　621基于STAT3/5信号通路的药物筛选模型651
　　622基于HIV Tat基因转录调控通路的药物筛选模型654
　　623基于X蛋白反式激活的抗HBV药物筛选模型655
　　624基于干扰素α信号通路的抗病毒药物筛选模型657
　　625基于PPARγ信号通路的药物筛选模型659
　　626基于雌激素受体β亚型信号通路的药物筛选模型662
　　627基于NFκB信号通路的药物筛选模型664
　　63高通量筛选667
　　631高通量药物筛选常用仪器667
　　632筛选操作668
　　633数据存储和处理669
　　参考文献669
　　第7章新药发现过程中吸收、代谢、分布和毒性的研究674
　　71吸收的体外和原位模型675
　　711吸收的体外模型675
　　712在体单次灌流方法研究药物在肠道的吸收678
　　72分布的体外模型680
　　721药物与血浆蛋白结合实验680
　　722血脑屏障模型682
　　73代谢的体外模型684
　　731代谢稳定性研究684
　　732代谢酶的确定686
　　733代谢酶抑制的测定687
　　734肠道菌群对药物的代谢转化研究690
　　74早期发现毒理学研究691
　　741预测模型691
　　742体外高通量毒性筛选692
　　743活性代谢产物的检测695
　　744高内涵筛选技术695
　　745动物试验696
　　参考文献696
　　附录正常实验动物和模型动物各项指标参考值698
　　表1实验动物安全采血量698
　　表2外周血血细胞指标（一）698
　　表3外周血红细胞及血小板计数指标（二）699
　　表4外周血白细胞及其分类计数（三）700
　　表5外周血白细胞指标（四）701
　　表6血清生化指标（一）701
　　表7血清生化指标（二）702
　　表8血清生化指标（三）702
　　表9心电图指标702
　　表10凝血和纤溶系统指标703
　　表11常见动物骨髓象703
　　表12实验动物脏器重量704
　　表13实验动物体温和血液温度704
　　表14实验动物临床生理指标705
　　表15实验动物饲料量、饮水量、产热量705
　　表16实验动物排便排尿量706
　　表17实验动物生殖生理指标706
　　表18实验动物蛋白指标707
　　表19实验动物肠道长度708
　　表20雌性NOD/Lt小鼠不同周龄血糖变化708
　　表21kk小鼠携带AY基因饲喂高脂饲料后不同性别动物的血糖变化710
　　表22kk小鼠携带AY基因饲喂繁殖饲料不同性别动物的血糖变化710
　　表23kk小鼠未携带AY基因饲喂高脂饲料不同性别动物的血糖变化711
　　表24kk小鼠未携带AY基因饲喂繁殖饲料不同性别动物的血糖变化711
　　表25不同年龄nu/nu、nu/+小鼠脾脏中含免疫球蛋白的细胞（CIg）分布712
　　表26间接免疫荧光测定不同淋巴组织浆细胞中类型分布712
　　表27SCID小鼠相关数据713
　　表28自发性高血压（SHR）大鼠与WKY大鼠血流动力学参数713
　　表29年轻自发性高血压（SHR）大鼠（12周龄）生化检验参数（一）713
　　表30年老自发性高血压（SHR）大鼠（22周龄）生化检验参数（二）714
　　表31年轻易卒中型自发性高血压（SHRsp）大鼠（12周龄）生化检验参数（三）
　　715
　　表32年老易卒中型自发性高血压（SHRsp）大鼠（22周龄）生化检验参数（四）
　　716
　　表33年轻WKY大鼠（12周龄）生化检验参数（五）717
　　表34年老WKY大鼠（22周龄）生化检验参数（六）718
　　缩略词对照表719

　　    现代新药药理学研究涉及多学科领域。本书介绍了常用的分子药理学实验方法、新药的主要药效学评价方法和非临床安全性评价方法；同时本书述介绍了药理学实验中常用的统计学知识和分析方法，以及具有特色的基于报告基因的新药筛选方法和新药早期研究方法。本书编审人员多年从事新药药理学研究，具有丰富的实践经验。书中介绍的方法可操作性强，内容较新颖，对新药研发人员开展药理学实验具有很强的指导作用。本书的读者对象为从事新药研发的科研人员和医药院校的学生、研究生。