神经生物学实验原理与技术

　　序
　　前言
　　1 神经生物学实验方法学 1
　　1.1 科学思维方法学 1
　　1.1.1 科学技术的历史动力 1
　　1.1.2 辩证地去求索 3
　　1.1.3 辩证地去思考 7
　　1.1.4 辩证地去验证 17
　　1.1.5 辩证地去训练 24
　　1.2 实验设计方法学 29
　　1.2.1 选题 30
　　1.2.2 专业设计 44
　　1.2.3 对照设计 54
　　1.2.4 统计设计 63
　　1.3 实验分析方法学 79
　　1.3.1 数据整理 79
　　1.3.2 统计分析 88
　　1.3.3 专业分析 100
　　1.3.4 论文书写 109
　　1.4 电刺激方法学 117
　　1.4.1 电刺激的基本原理 117
　　1.4.2 电刺激的物理特性 119
　　1.4.3 神经制备的生物特性 123
　　1.4.4 选择性刺激 127
　　1.4.5 刺激电流扩散 132
　　1.5 电记录方法学 136
　　1.5.1 容积导体内记录 136
　　1.5.2 诱发电位记录 143
　　1.5.3 单单位记录 150
　　1.5.4 计算机辅助的记录 158
　　1.5.5 细胞内记录 161
　　1.5.6 膜片钳记录 174
　　1.5.7 神经纤维速度谱测定 178
　　1.5.8 轴突分叉点位置测定 182
　　1.5.9 压脚痛阔测定法 187
　　1.6 神经化学方法学 190
　　1.6.1 组织细胞破碎法 190
　　1.6.2 突触体制备 193
　　1.6.3 电泳法 198
　　1.6.4 色谱法 203
　　1.6.5 高效液相色谱法 213
　　1.6.6 微透析技术 222
　　1.7 化学神经解剖学方法学 229
　　1.7.1 免疫细胞化学技术 229
　　1.7.2 原位杂交组织化学技术 239
　　1.7.3 受体定位技术 248
　　1.7.4 免疫电子显微镜技术 250
　　1.8 神经形态学方法学 253
　　1.8.1 辣根过氧化物酶示踪技术 253
　　1.8.2 荧光素示踪技术 260
　　1.8.3 放射性核素示踪技术 262
　　1.8.4 顺行示踪技术 269
　　1.8.5 激光扫描共焦显微镜技术 271
　　1.8.6 定量及分析细胞学技术 278
　　1.9 分子神经生物学方法学 282
　　1.9.1 核酸分子杂交技术 282
　　1.9.2 蛋白质印迹法 290
　　1.9.3 DNA重组技术 296
　　1.9.4 聚合酶链反应技术 306
　　1.9.5 DNA序列测定技术 313
　　1.9.6 mRNA差异显示技术 323
　　1.9.7 基因芯片技术 329
　　1.9.8 转基因动物技术 334
　　1.10 神经行为学实验方法学 338
　　1.10.1 行为学实验的神经基础及常用动物 339
　　1.10.2 常用的高级脑功能研究方法 340
　　1.10.3 常用痛行为研究方法 348
　　1.11.脑成像 352
　　1.11.1 计算机辅助体层摄影 352
　　1.11.2 磁共振成像 356
　　1.11.3 放射性核素断层成像 362
　　1.11.4 超声成像 365
　　2 神经生物学实验与示敬 368
　　2.1 神经生理学实验 368
　　2.1.1 家兔外周神经干复合动作电位记录 368
　　2.1.2 家兔后肢传人神经纤维速度谱 370
　　2.1.3 扩张肛门对猫慨神经后根放电的影响 372
　　2.1.4 大鼠脊髓节段性及下行性诱发电位记录 374
　　2.1.5 脊髓节段性缺血时脊髓诱发电位的变化 375
　　2.1.6 家兔大脑皮质体感诱发电位记录 377
　　2.1.7 脑缺血对家兔大脑皮质诱发电位的变化 379
　　2.1.8 瞻蛤离体脊神经节神经元静息膜电位与动作电位记录 381
　　2.1.9 大鼠培养脑细胞膜的电学特性 384
　　2.1.10 大鼠在体脊神经节神经元动作电位的细胞内记录 386
　　2.1.11 猫脊髓背索突触后神经元的细胞内与细胞外记录 388
　　2.1.12 猫脊颈束-背索突触后神经元的顺、逆向反应 390
　　2.1.13 大鼠脊髓背角神经元电活动的细胞内记录 392
　　2.1.14 大鼠脊孤柬-背索突触后神经元对躯体与内脏传人的反应 394
　　2.1.15 家兔中缝大核对外周传人刺激的反应 397
　　2.1.16 家兔丘脑腹后外侧核电活动的细胞外记录 398
　　2.1.17 躯体内脏传人在脊髓背角的相互作用 400
　　2.1.18 缺氧预适应鼠脑提取液对ATP敏感性饵电流的作用 401
　　2.2 神经化学实验 408
　　2.2.1 缺氧耐受小鼠脑匀浆提取液的抗缺氧作用 408
　　2.2.2 急性重复缺氧小鼠脑单胺类含量的变化 411
　　2.2.3 不同强度躯体刺激对家兔脑脊液中CaH、MgH含量的影响 414
　　2.2.4 不同强度躯体刺激对家兔脑脊液中单胶类含量的影响 417
　　2.2.5 兔脑内腺昔的微透析法测定 420
　　2.2.6 缺氧对小鼠大脑应质突触体LDH透出率的影响 421
　　2.2.7 低氧预适应小鼠脑匀浆提取液对PC12细胞的保护效应 423
　　2.3 神经组织免疫细胞化学实验 425
　　2.3.1 延髓背角和中缝太核内的P物质样阳性结构免疫细胞化学或免疫荧光细胞化学染色法 425
　　2.3.2 大鼠三叉神经节内阿片μ受体与降钙素基因相关肤共存的阳性神经元免疫荧光细胞化学双重标记染色法 428
　　2.3.3 大鼠延髓背角浅层内P物质样阳性终未与啻钙结合蛋白神经元的联系免疫荧光细胞化学双标染色及激光扫描共焦显微镜观察 430
　　2.3.4 面口部注射甲醒榕液后大鼠延髓背角内的FOS样阳性神经元观察一一免疫细胞化学染色法 432
　　2.3.5 大鼠中缝核簇内5 起色胶样阳性神经元表达FOS蛋白一一免疫细胞化学双标染包法 435
　　2.3.6 大鼠延髓背角内向丘脑投射的FOS 样阳性神经元逆行标记与免疫细胞化学双标染色法 437
　　2.3.7 大鼠三叉神经节内钙结合素mRNA 阳性神经元的分布放射性核素标记的原位杂交组织化学法 440
　　2.3.8 大鼠中脑导水管周围灰质内的5-羟色胶样阳性亚微结构免疫电镜法 444
　　2.3.9 大鼠孤束核内GABA 能纤维终末与F物质受体样阳性神经元的突触联系包埋前与包埋后免疫电镜双标记法 446
　　2.3.10 大鼠延髓背角内GABA 能神经元与F物质能纤维终末的突触联系包埋前免疫电镜双标记法 449
　　2.4 神经形态学实验 452
　　2.4.1 大鼠脊髓灰质向孤束核的投射 452
　　2.4.2 猫脊髓背角神经元向外侧颈核和背索核的分支投射 454
　　2.4.3 大鼠脊孤束背索突触后神经元的超（亚）微结构 455
　　2.4.4 大鼠脊孤束背索突触后神经元对躯体感觉核与内脏感觉核的分支投射 457
　　2.4.5 大鼠脊髓立体定位磁控过半夹断模型 459
　　2.4.6 大鼠臂旁核向杏仁中央核的投射HRP逆行追踪方法 461
　　2.4.7 大鼠中脑导水管周围灰质向伏核的5-羟色胶能投射H即逆行迫踪与免疫细胞化学染色相结舍的双标记法 464
　　2.4.8 大鼠延髓背角内P物质受体样阳性神经元向丘脑胶状质核技射荧光素逆行追踪与免疫荧光染色相结合的双标记方法 466
　　2.4.9 大鼠中缝大核向脊髓背角和延髓背角的分支投射荧光素双标记法 469
　　2.4.10 中脑导水管周围灰质和中缝背核内5-羟色胶能神经元的下行分支投射荧光素双标记与免疫荧光染色相结合的三标记法 472
　　2.4.11 大鼠三叉神经脊柬核吻侧亚核向三叉神经运动核的投射一一植物凝集素（PHA-L）顺行示踪法 474
　　2.4.12 大鼠延髓背角浅层向臂旁外侧核及丘脑腹后内侧核的投射一-BDA 顺行示踪法 477
　　2.4.13 大鼠中脑导水管周围灰质中缝大核三叉神经感觉核簇的间接投射PHA-L顺行示踪与HRP逆行追踪相结合的双标记法的光镜观察 480
　　2.4.14 大鼠中脑导水管周围灰质-中缝大核-三卫神经脊束核尾侧亚核的间接投射PHA-L顺行示踪与HRP逆行追踪相结合的双标记法的电镜观察 483
　　2.4.15 大鼠延髓背角向丘脑技射神经元与5-羟色胶阳性终末的突触联系HRP逆行追踪与免疫细胞化学染色双标记法 486
　　2.4.16 大鼠孤束核-臂旁核-中央杏仁核的同接投射通路——溃变与HRP 逆行追踪相结合的双标记法 489
　　2.5 分子神经生物学实验 492
　　2.5.1 用差异显示法分离特异表达的基因片段 492
　　2.5.2 慢性缺氧培养细胞中缺氧诱导因子-1的提取与检测 497
　　2.5.3 大鼠三叉神经节总RNA的提取及cDNA的制备 500
　　2.5.4 5-HT，受体亚型mRNA在大鼠三叉神经节的表达 502
　　2.5.5 乙酷胆碱转移酶在大鼠纹状体的表达及其DNA 片段的回收 505
　　2.5.6 乙酷胆碱转移酶DNA片段的亚克隆 507
　　2.5.7 ChAT-pGEM重组质粒DNA的制备及限制性酶酶切分析 510
　　2.5.8 ChAT-pGEM重组质粒DNA序列的测定 513
　　2.5.9 乙酷胆碱转移酶表达蛋白的SDS 聚丙烯酷胶凝胶电泳分析 516
　　2.5.10 乙酷胆碱转移酶在大鼠纹状体分布的Western印迹检测 520
　　2.5.11.性激素对周围伤害性刺激诱导脊髓PPDmRNA表达上调的影响 523
　　2.5.12 坐骨神经部分切断后初级感觉神经元（背根节）的差异表达基因克隆 526
　　2.6 神经行为学实验 530
　　2.6.1.一足致炎大鼠双足痛感受性的变化 530
　　2.6.2 甲醛溶液致炎大鼠疼痛行为的观察 532
　　2.6.3 神经反射在一足致炎大鼠非致炎足痛阔变化中的作用 533
　　2.6.4 体液因素在一足致炎大鼠非致炎足痛阑变化中的作用 536
　　2.6.5 急性缺氧预适应对小鼠缺氧耐受性的影响 537
　　2.6.6 麻醉与兴奋小鼠缺氧耐受性的变化 539
　　2.6.7 大鼠脊髓横断及半横断模型的复制 541
　　2.6.8 慢性束缚应激对大鼠空间学习记忆能力的影响 543
　　2.6.9 创伤后应激障碍模型大鼠的自发活动和焦虑水平检测 548
　　3 神经生物学资料 552
　　3.1.神经生物学常见概念 552
　　3.1.1.生物电学常见概念 552
　　3.1.2.生物化学常见词汇 558
　　3.1.3.细胞培养常见词汇 561
　　3.1.4.分子生物学常见词汇 565
　　3.2 常用的实验方法 570
　　3.2.1.电生理学仪器方法 570
　　3.2.2 动物实验的实施 577
　　3.3 实验动物常用数据 589
　　3.3.1 实验动物常用生理数据 589
　　3.3.2 实验动物常用麻醉剂与肌肉松弛剂 589
　　3.4 常用试剂、缓冲液、贮存液与酶的配制 592
　　3.4.1 组织培养常用试剂 592
　　3.4.2 电泳缓冲剂 593
　　3.4.3 常用贮存液
　　3.4.4 常用酶的配制 597
　　3.5 常用限制性酶识别序列 598
　　3.6 常用细胞系、细胞培养基、抗生素 603
　　3.6.1 细胞系 603
　　3.6.2 常用培养液成分及配方

　　神经生物学是生命科学的前沿，是应用神经解剖学、神经生理学、神经化学和分子生物学等多学科现代技术，对神经系统进行多层次综合研究的实验性科学。《神经生物学实验原理与技术》作为《生命科学实验指南系列》的重要分册，遵循理性思维与实际操作相结合的原则，全面而系统地介绍了神经生物学实验研究的方法学（第1篇），并将编著者20余年的有关科研成果转化为可操作的实验指导（第2篇），以及提供可供参考的有关实验研究信息（第3篇）。