现代发酵工程丛书：现代发酵微生物实验技术

　　第一章显微技术
　　第一节显微观察
　　一、相差显微镜
　　实验11相差显微镜的使用
　　二、荧光显微镜
　　实验12荧光显微镜的使用
　　三、电子显微镜
　　实验13细菌、酵母菌超薄切片的透射电镜观察
　　实验14噬菌体的透射电镜观察
　　实验15质粒DNA的透射电镜观察
　　实验16酵母细胞的扫描电镜观察
　　第二节显微摄影
　　实验17显微摄影、菌落摄影和凝胶摄影
　　第三节放射自显影
　　实验18硝酸纤维素滤纸上标记DNA的放射自显影
　　第四节显微操作技术用于单细胞分离
　　实验19显微操纵器用于单细胞分离
　　实验110显微操纵器用于酵母子囊的解剖及子囊孢子单孢化
　　实验111玻璃微型工具的制作
　　第五节流式细胞仪测定细胞核内DNA的含量
　　实验112流式细胞仪计数法
　　第二章微生物细胞特殊结构的观察
　　第一节染色技术
　　一、染色的基本原理
　　二、染料
　　三、染色
　　实验21真菌的荧光染色与观察
　　第二节细胞主要结构成分的分离与观察
　　实验22革兰阳性细菌细胞壁的制备
　　实验23酵母细胞壁甘露聚糖的制备
　　实验24细胞壁的形态观察
　　实验25革兰阴性菌细胞外膜蛋白的分离
　　实验26细菌荚膜的观察
　　实验27细菌鞭毛的观察
　　实验28微生物细胞核的观察
　　实验29细菌染色体DNA的分离与观察
　　实验210异染颗粒的观察
　　实验211酵母细胞内脂肪颗粒和肝糖颗粒的观察
　　实验212酵母液泡及线粒体的提取
　　第三节芽孢、子囊孢子和假菌丝的观察
　　一、芽孢
　　实验213细菌芽孢形成及发芽的观察
　　实验214伴孢晶体的观察
　　二、酵母子囊孢子
　　实验215酵母子囊孢子的形成及观察
　　实验216酿酒酵母单倍体细胞的制备与鉴定
　　三、流式细胞术
　　实验217酿酒酵母染色体倍性鉴定
　　四、酵母假菌丝
　　实验218酵母假菌丝的观察
　　第三章噬菌体
　　实验31噬菌体的分离与纯化
　　实验32高效价噬菌体原液的制备
　　实验33溶源菌的鉴定
　　实验34抗噬菌体产α淀粉酶菌株的选育
　　第四章标记菌种的获得与应用
　　第一节富集培养技术在获得标记菌种中的应用
　　一、营养缺陷型富集法在原核细胞中的应用
　　实验41芽孢杆菌营养缺陷型的筛选
　　二、营养缺陷型富集法在真核细胞中的应用
　　实验42酵母营养缺陷型的筛选
　　实验43青霉菌营养缺陷型菌株的筛选
　　三、浓度梯度法富集抗性突变株
　　四、富集法在研究次级代谢的重组DNA技术中的应用
　　第二节营养缺陷型标记菌种的获得
　　一、诱变方法
　　二、淘汰野生型
　　三、检出缺陷型
　　四、营养缺陷型生长谱的确定
　　实验44芽孢杆菌营养缺陷型生长谱的确定
　　第三节呼吸缺陷型标记菌种的获得
　　实验45酵母呼吸缺陷型的筛选
　　第四节抗反馈调节抗性突变株的获得与应用
　　实验46氨基酸抗反馈调节突变株的选育
　　第五章原生质体系列育种技术
　　第一节工业菌种育种的策略
　　第二节原生质体融合育种
　　一、原生质体融合育种的特点
　　二、原生质体融合育种步骤与要点
　　三、原生质体再生率和融合率的计算
　　实验51芽孢杆菌的原生质体融合
　　实验52链霉菌原生质体融合
　　实验53小单胞菌的原生质体融合
　　实验54酿酒酵母的原生质体融合
　　实验55丝状真菌的原生质体融合
　　第三节原生质体转化育种
　　实验56芽孢杆菌原生质体转化
　　实验57质粒DNA转化链霉菌原生质体
　　实验58酿酒酵母的原生质体转化法
　　实验59真菌原生质体转化
　　第四节原生质体诱变育种
　　实验510芽孢杆菌种间融合子F262原生质体诱变育种
　　实验511紫外线诱变原生质体选育L谷氨酸高产菌
　　第五节原生质体技术中的一些特殊技术
　　一、紫外线照射原生质体增加融合率
　　二、供体原生质体的热灭活
　　三、原生质体电融合技术
　　实验512电诱导酵母原生质体融合
　　四、遗传转移
　　实验513原生质体融合法转移酵母线粒体及杀伤质粒
　　第六章基因工程育种技术
　　第一节基因工程的基本过程和原理
　　一、载体
　　二、DNA重组用酶
　　第二节大肠杆菌基因工程
　　一、大肠杆菌感受态细胞的制备和转化
　　实验61用氯化钙制备和转化感受态大肠杆菌
　　实验62用氯化钙制备感受态大肠杆菌
　　实验63用PEG制备和转化大肠杆菌感受态细胞
　　实验64大肠杆菌的电击转化
　　二、大肠杆菌中质粒的提取与纯化
　　实验65质粒的大量提取与纯化
　　实验66质粒的小量提取
　　实验67用硅胶膜分离法小量提取质粒
　　三、外源基因在大肠杆菌中的高表达
　　实验68载体和基因的酶切
　　实验69基因与载体的连接
　　第三节非大肠杆菌微生物基因工程
　　一、芽孢杆菌基因工程
　　实验610枯草杆菌感受态细胞的制备和转化
　　实验611枯草杆菌染色体DNA的提取
　　实验612枯草芽孢杆菌（Bacillus  subtilis）碱性果胶酶基因的PCR扩增
　　实验613从电泳凝胶中分离枯草芽孢杆菌（Bacillus  subtilis）碱性果胶酶基因
　　实验614枯草杆菌转化子质粒的提取和检测
　　实验615地衣芽孢杆菌感受态细胞的诱导形成及其高效电转化
　　二、酵母基因工程
　　实验616酵母染色体DNA的提取
　　实验617酿酒酵母的乙酸锂完整细胞转化法
　　实验618单链载体DNA的制备
　　实验619酵母菌质粒DNA的提取
　　实验620碱性果胶酶基因重组巴斯德毕赤酵母的构建
　　实验621羟酸还原异构酶基因多拷贝重组啤酒酵母的构建
　　第四节其他基因工程育种常用技术
　　实验622酿酒酵母W303甘油酯酶GPP2基因敲除技术
　　实验623粗糙脉孢菌漆酶基因的定点突变技术
　　第五节蛋白质纯化技术
　　实验624利用His标签进行Ni柱纯化甘油脱氢酶的分离技术
　　实验625离子交换色谱技术分离纯化蛋白质
　　第七章微生物细胞固定化方法
　　第一节载体结合法
　　一、表面吸附法
　　二、共价结合法
　　实验71Amycolatopsis  spST2710的载体固定化
　　第二节交联法
　　第三节包埋法
　　一、藻酸钙凝胶包埋法
　　实验72酿酒酵母的藻酸钙固定化
　　实验73固定化枯草杆菌连续生产耐热α淀粉酶
　　二、κ角叉胶包埋法
　　实验74κ角叉胶一步包埋法
　　实验75κ角叉胶二步包埋法
　　实验76固定化酵母连续生产酒精
　　实验77固定化细胞的回收与活细胞计数
　　三、聚丙烯酰胺凝胶包埋法
　　实验78大肠杆菌的聚丙烯酰胺凝胶固定化
　　四、光交联树脂前聚体包埋法
　　实验79光交联树脂固定化原生质体
　　第八章菌种保藏方法与机构
　　第一节菌种的退化与防治措施
　　一、菌种退化的现象及原因
　　二、防止退化措施
　　第二节常用菌种保藏
　　一、菌种保藏的原理
　　二、常用的菌种保藏方法
　　实验81斜面保藏法
　　实验82液体石蜡保藏法
　　实验83载体保藏法
　　实验84甘油管低温保藏法
　　实验85液氮冷冻保藏法
　　实验86真空冷冻干燥保藏法
　　第三节基因工程菌的保藏
　　第四节著名菌种保藏及专利菌种保藏机构
　　一、中国微生物菌种保藏管理委员会组织系统
　　二、国际著名菌种保藏机构
　　三、国际确认的专利菌种保藏机构（IDA）
　　参考文献

　　    《现代发酵微生物实验技术（第二版）》作者所在的发酵工程学科是我国早授予的国家重点学科之一，参与编写者在教学与科研上都有较为丰富的实践经验和研究成果。
　　    《现代发酵微生物实验技术（第二版）》延续了《现代发酵微生物实验技术》(一版)编写中“图文并茂，有论述，有操作，有结果”的特色。
　　    《现代发酵微生物实验技术（第二版）》在内容上保留了显微技术、微生物细胞特殊结构的观察、噬菌体、标记菌种获得与应用、原生质体系列育种技术和固定化细胞生物转化等实用技术，并结合本研究室近几年的研究经验，对