第一部分 基因工程实验技术教学组织实施形式
一、实验学习目标
二、实验学习要求
三、实验教学组织实施流程
四、实验报告要求
五、文档格式
第二部分 基因工程实验技术与原理
第一章 基因组DNA的提取
第二章 质粒载体
第三章 PCR基因扩增与引物设计
第四章 DNA重组技术
第五章 重组体分析与检测
第六章 基因表达
第七章 蛋白质分析技术
第八章 重组蛋白质的分离纯化与制备
第三部分 基础实验
实验一 细菌基因组DNA的提取及电泳鉴定
实验二 PCR法扩增目的基因及PCR产物的纯化
实验三 碱裂解法提取质粒载体及电泳鉴定
实验四 载体质粒、PCR产物的双酶切及酶切产物纯化
实验五 载体片段与PCR产物的连接
实验六 感受态细胞的制备和重组质粒的转化
实验七 重组子的鉴定
实验八 阳性重组质粒转化表达菌株
实验九 目的基因的诱导表达和鉴定
实验十 表达产物的分离纯化
第四部分 综合设计实验
项目一 枯草芽孢杆菌碱性磷酸酶基因的克隆与表达
项目二 大肠杆菌甘露醇-1-磷酸脱氢酶基因的克隆与表达
项目三 弧菌外膜蛋白的基因克隆、蛋白表达与纯化
项目四 泥蚶谷氨酰胺合成酶基因的克隆和表达分析
第五部分 附录
一、氨基酸符号及相应的密码子
二、常用限制性内切酶酶切位点及缓冲液
三、常用市售酸的浓度
四、常用蛋白质分子量标准参照物
五、常用缓冲液的配制
六、分子生物学常用试剂的配制
七、琼脂糖凝胶浓度与线形DNA的最佳分辨范围
八、核酸、蛋白质的常用数据
九、菌种与DNA的保存
十、基因工程实验注意事项
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